高效液相色譜儀（HPLC）的系統壓力穩定性是儀器正常運行的核心指標，通常反相色譜常規操作壓力范圍為800-2000psi，壓力超過設定閾值或突然升高超過300psi以上，會導致流速不穩、峰形畸變、部件磨損，甚至損壞泵體、色譜柱等關鍵組件，直接影響分析工作的連續性與數據可靠性。壓力過高是HPLC使用中的故障之一，成因多與管路堵塞、部件污染、操作不當、色譜柱問題等相關。本文結合儀器結構與實操經驗，系統梳理壓力過高的核心成因，配套簡要排查思路，為實驗室高效解決故障提供參考。
一、色譜柱相關成因（最核心常見因素）
色譜柱是系統壓力的主要承載部件，其內部填料堵塞、污染或性能衰減是導致壓力過高的首要原因。其一，樣品基質污染，樣品中未過濾的懸浮物、蛋白質、油脂等雜質，會隨流動相進入色譜柱，沉積在填料表面或孔隙中，逐步堵塞流道，導致液流阻力增大、壓力攀升。尤其在分析復雜基質樣品（如血漿、食品提取液）時，若前處理（過濾膜孔徑過大、未離心除雜），污染問題會更突出。
其二，流動相污染或不當使用，流動相未過濾（未通過0.45μm濾膜）、儲存過程中滋生微生物，或混入有機雜質，會隨液流進入色譜柱，堵塞填料孔隙；同時，流動相pH值超出色譜柱耐受范圍（如反相柱通常耐受pH2-8），會導致填料鍵合相水解、顆粒塌陷，使柱內流道變窄，壓力驟升。此外，不同類型流動相混合不當產生沉淀（如緩沖液與有機溶劑配比失衡），沉淀會直接堵塞色譜柱入口，引發壓力急劇升高。
其三，色譜柱老化或損壞，長期使用后填料顆粒磨損、破碎，或柱床塌陷，會導致柱內阻力增大；色譜柱入口篩板堵塞也是常見問題，篩板孔徑細?。ㄍǔ?μm），易被雜質堵塞，使壓力逐步升高，表現為基線穩定但壓力持續上升。
二、管路與連接件堵塞或異常
HPLC系統管路纖細，連接件眾多，任何部位的堵塞、變形或密封不當，都會導致液流阻力增加，引發壓力過高。其一，進樣系統污染堵塞，進樣針、進樣閥殘留樣品雜質，或進樣閥轉子密封墊磨損，會導致樣品通路堵塞；進樣口濾器（若配備）被雜質堵塞，也會阻礙液流，使壓力升高，此類問題多伴隨進樣后壓力突然波動。
其二，溶劑濾頭堵塞，溶劑瓶內的溶劑濾頭（又稱吸濾頭）用于過濾流動相中的雜質，若長期未清洗、更換，或流動相污染嚴重，濾頭孔隙會被堵塞，導致泵吸液阻力增大，系統壓力升高，同時可能伴隨流速不穩、泵體異響。此外，濾頭若吸附微生物、有機凝膠，也會影響液流順暢性。
其三，管路堵塞或變形，系統管路（尤其是泵出口至色譜柱入口、色譜柱出口至檢測器入口段）若被流動相沉淀、樣品雜質堵塞，或因安裝不當、碰撞導致管路彎折、變形，會縮小液流通道，增加阻力；連接件（接頭、卡套）松動、密封不嚴，雖不會直接導致堵塞，但可能因漏液引發壓力波動，若漏液部位伴隨雜質沉積，后續會逐步發展為堵塞，導致壓力升高。
三、泵體部件故障或污染
泵體是系統液流的動力源，其部件污染、磨損或故障會直接導致壓力異常升高。其一，泵頭污染堵塞，泵頭內的單向閥、密封圈、柱塞桿殘留流動相沉淀、樣品雜質，或長期使用后積累磨損碎屑，會阻礙液流輸送，導致泵腔壓力升高，表現為系統壓力持續偏高且波動較大。單向閥堵塞是典型問題，雜質附著在閥芯上，會影響閥門開合，使液流無法順暢通過，壓力驟升。
其二，柱塞桿磨損或密封圈老化，柱塞桿與密封圈長期摩擦導致磨損，會使泵腔密封性能下降，為維持設定流速，泵體需增大壓力，導致系統壓力升高，同時可能伴隨泵頭漏液；密封圈老化、變形也會引發類似問題，漏液伴隨壓力異常。此外，泵腔內部污染未及時清理，會加劇部件磨損，進一步惡化壓力問題。
四、檢測器及輔助部件異常
檢測器流通池及后續管路異常，也可能導致系統壓力升高，此類問題多在壓力傳導至檢測器后顯現。其一，通池堵塞，檢測器流通池孔徑極?。ㄍǔ閹孜⒚字翈资⒚祝?，若流動相含雜質、微生物，或樣品未過濾，雜質會沉積在流通池內，堵塞液流通道，導致壓力升高，同時伴隨基線波動、檢測信號異常（如出現尖峰、基線漂移）。
其二，輔助部件異常，若系統配備在線脫氣機、柱溫箱，脫氣機管路堵塞、柱溫箱內管路彎折，或柱溫設置過低（流動相粘度增大，液流阻力增加），也會間接導致系統壓力升高。此外，廢液管路堵塞、回壓過大，會使整個系統液流受阻，壓力逐步攀升。
五、操作及環境因素引發的壓力過高
不規范操作與環境因素雖非直接成因，但會誘發或加劇壓力問題。其一，速設置過高，超出色譜柱及管路耐受范圍，會導致系統壓力按流速平方倍增長，尤其是色譜柱老化后，耐受流速降低，盲目升高流速會使壓力驟升。其二，梯度洗脫參數設置不當，流動相比例突變（如有機溶劑比例快速升高），可能導致緩沖液析出沉淀，堵塞管路與色譜柱；溫度變化過大（如環境溫度過低，流動相粘度增大），也會使液流阻力增加，壓力升高。
其三，樣品進樣量過大或濃度過高，過量樣品進入色譜柱，會導致填料過載，雜質堆積速度加快，短期內心壓力逐步升高；高濃度樣品中的雜質含量更高，會加速管路、色譜柱的堵塞進程。此外，實驗結束后未及時沖洗系統，流動相殘留于管路、色譜柱內，易滋生微生物或產生結晶，下次開機時會出現壓力過高。
六、故障排查核心原則
排查壓力過高問題需遵循“從簡單到復雜、從外部到內部"的原則：先檢查流速設置、流動相狀態、溶劑濾頭，排除基礎因素；再通過分段斷開管路（如斷開色譜柱入口，檢查泵出口壓力），定位壓力過高的區段；最后針對對應部件（管路、進樣系統、色譜柱、泵體）進行清洗、更換或維修。日常做好儀器維護，規范樣品前處理與流動相制備，定期清洗管路、部件，可大幅降低壓力過高故障的發生率。
